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天山假狼毒萜类成分的分离及其对HGC-27胃癌细胞的影响

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  • 用途: 硕士毕业论文 Master Thesis
  • 作者:上海论文网
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  • 日期:2024-09-08
  • 来源:上海论文网

药学论文哪里有?笔者研究得出结论:天山假狼毒中含有丰富的有效成分,其中萜类成分的活性显著,可为今后继续研究该物质作用机制提供一定的理论基础。

第一章 天山假狼毒的化学成分

1.1萜类

萜类化合物在自然界中广泛存在,如高等植物、真菌、微生物、以及海洋生物都有萜类成分存在,是中草药中一类比较重要的化合物且具有显著的生物活性[13,14]。天山假狼毒药材中所含萜类成分主要包括倍半萜、二萜、三萜类成分,其中二萜多为瑞香烷型[15-17]。赵丹等[15,18]首次从天山假狼毒根提取液中分离得到多个新的萜类化合物包括瑞香烷型二萜和愈创木烷型倍半萜,分别是tianchaterpene A、B、stelletianschas A-E和已知萜类化合物3个。随后,姚彩虹等[4,16,19]从天山假狼毒花石油醚部位中分离得到2个萜类化合物。并有研究者曾推测对动物产生毒性的可能是该类物质[20]。天山假狼毒中的萜类化学成分见表1-1和图1.1。

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实验结果

从天山假狼毒CH2Cl2和EtO AC浸膏部位中共分离、鉴定得到40个化合物,见表1-3。

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1H-NMR(600 MHz,CDCl3)谱中显示出的三个甲基信号δH ppm:1.25(1H,d,J = 7.2Hz,H-14),1.15(3H,s,H-16),1.31(3H,s,H-17)形成二甲基环丙烷,以及δH 0.95(3H,d,J = 6.6 Hz,H-18),1.79(3H,dd,J = 1.8,2.4 Hz,H-19)的两个甲基信号,表明化合物1含有巴豆烷型骨架。此外根据δH 7.75(1H,s,H-1),δC 164.5(C-1),134.0(C-2)以及210.2(C-3)提示化合物具有一个α,β不饱和酮羰基信号;δH 8.05(1H,dd,J = 1.2,8.4 Hz,H-3′),7.46(1H,t,J = 7.8 Hz,H-4′),7.60(1H,t,J = 7.2 Hz,H-5′)三个芳香质子信号,表明存在苯基,以及δH 4.27(1H,s,H-5),3.30(1H,s,H-7)显示两个含氧质子信号。在APT碳谱中显示27个碳信号,其中苯甲酰基δC 167.9(C-1')上显示有羰基信号,δC 72.5(C-4),71.7(C-5),61.8(C-6),65.8(C-7),75.4(C-9)提示具有5个连氧碳信号,以及δC 15.8(C-16),23.0(C-17),19.1(C-18),9.86(C-19)的四个二萜特征甲基信号。综合以上数据与文献对比,化合物1与已知化合物6α,7α-epoxy-5β-hydroxy-12-deoxyphorbol-13-tetradecanoate结构相似[43],除了在δC 64.7(C-13)上连接的苯甲酰基不同,因此推测化合物1为巴豆烷型骨架化合物。

第二章 天山假狼毒二氯部位化合物对HGC-27细胞的影响

2.1 实验材料与试剂

2.11 实验仪器与试剂

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2.2实验方法

2.21 MTT法检测29个化合物的细胞活性

分别精密称取化合物1-29配制成12.5,25,50,100,200 μM浓度的溶液。取对数生长期的HGC-27胃癌细胞,细胞接种浓度为4×105个/mL,每孔取100 μL接种于96孔培养板中,24 h后加入配置好的化合物1-29和顺铂阳性对照药,继续培养48 h;每孔再加入20 µL的MTT溶液(浓度为5 mg/mL),孵育4 h后弃去上清液;之后每孔加入150 µL的DMSO,避光振荡10 min,用酶标仪在570 nm检测波长下测定每个孔的OD值。抑制率的计算公式为:抑制率=(1-OD给药/OD对照)×100%。IC50值用Excel软件计算。

结论

本文在综述了近年来天山假狼毒化学成分和药理作用的研究基础上,对天山假狼毒的化学成分进行了系统的研究,并对二氯部位分离得到的化合物进行了体外抗肿瘤活性的筛选。本实验研究结果如下:

1、利用多种柱色谱技术结合制备型HPLC从天山假狼毒的二氯甲烷和乙酸乙酯部位中分离纯化得到了40个化合物,并结合理化性质和NMR、MS等光谱技术鉴定出全部化合物的结构,其中萜类化合物20个,分别为tianchaterpene C(1)、 tianchaterpene D(2)、tianchaterpene E(3)、tianchaterpene F(4)、 Phorbol 12-benzoate-13-acetate 20-homovanillate(5)、yuanhuaoate A(6)、vesiculosion(7)、yuanhuacine(8)、daphgenkin A(9)、yuanhuadine(10)、blumenol B(11)、blumenol A(12)、tianchaterpene G(14)、tianchaterpene H(15)、excoecariatoxin(16)、12-羟基瑞香毒素(17)、S-(+)-去氢催吐萝芙叶醇(30)、pubinernoid A(31)、(6E,9S)-9-hydroxy-4,6-megastigmadien-3-one(32)、tectoionol A(40);苯丙素类化合物10个,分别为(-)-落叶松酯醇(13)、rutamontine(19)、松脂醇(23)、马台树脂醇(24)、(-)-丁香素脂酚(28)、异荜澄茄素(33)、bisbenzopyran(34)、7-hydroxycoumarin(37)、forsythialan  A(38)、4-((3R)-3-(hydroxymethyl)-5-((Z)-3-hydroxyprop-1-en-1-yl)-7-methoxy-2,3-dihydrobenzofuran-2-yl)-2-methoxypheno(l39);生物碱类3个,分别为scorpinone(20)、N-苯乙基乙酰氨(22)、cyclo(D)-pro-(D)-leu(26);酚酸类5个,分别为dihydrosyringenin(21)、Threo-8s-7-methoxysyringylglycerol(25)、threo-3-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-ethoxypropane-1,2-diol(27)、threo-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-{4-[(E)-3-hydroxy-1-propenyl]-2-methoxyphenoxy}-1,3-propanediol(29)、瑞香醇酮(36);醌类2,5-二甲氧基对苯醌(18)和黄酮类3-hydroxy-5-methoxy-6-methyl-2,3-dihydro-4H-pyran-4-one(35)各一个,其中化合物1、2、3、4、14、15为6个新化合物,且除化合物7、23、24、25外其余为首次从该属植物中分离得到。

参考文献(略)

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