药学论文哪里有？本研究建立了灵敏、准确和可靠的LC-MS/MS同时测定草鱼血浆和肌肉中吡喹酮、反式-4-羟基吡喹酮及顺式-4-羟基吡喹酮的残留分析方法，并成功应用于草鱼体内的药动学和残留消除研究。
1 前言
1.5 毒理研究
吡喹酮是一种高效、安全低毒、广谱的抗寄生虫药，其毒性研究报道较多（Dayan et al., 2003）。Frohberg等人开展的口服半数致死量（Median lethal dose，LD50）研究表明小鼠LD50为2560 mg/kg；大鼠LD50为2840 mg/kg；兔子LD50为1050 mg/kg（Frohberg et al., 1984；Frohberg et al., 1981）。后续试验用高达1000 mg/kg的吡喹酮每天给药大鼠，持续4周；高达180 mg/kg每天给药于狗，持续13周，结果显示在大鼠和狗中没有观察到特别的重复剂量毒性作用（Frohberg et al., 1989）。据此，EMEA获得大鼠的吡喹酮最大无作用剂量（NOAEL）为33 mg/kg/day，狗的NOAEL为60 mg/kg/day。Kramers等的研究表明吡喹酮对人类缺乏诱变潜力；国际环境诱变剂和致癌防护委员会（ICPEMC）也得出结论吡喹酮在人体内代谢很快，基本不可能对人有任何诱变作用（Kramers et al., 1991）。
EMEA开展了大量生殖毒性试验研究，结果表明即使吡喹酮的实验剂量达到300mg/kg/day，在第Ⅰ阶段（生育）和第Ⅱ阶段（胎儿和母亲毒性和致畸性）实验中都没有表现出副作用。在有限的第III段测试（产前/产后毒性）中吡喹酮给药300 mg/kg/day后，在母体或它们的幼崽中也没有表现出有害作用。因此，EMEA批准吡喹酮在猫、狗和绵羊以及它们怀孕期间均可使用。Frohberg等分别给大鼠和仓鼠连续用吡喹酮104周和80周，都没有发现致癌产生，也没有在短期内加速肿瘤的发生（Frohberg., et al., 1984；Frohberg., et al., 1989；Frohberg et al., 1981）。Malcolm A. Moore等人用泰国肝吸虫感染的叙利亚仓鼠，随后给予吡喹酮1 kg/kg b.w.，持续80周共55次，最终实验结果也表明，吡喹酮对受损肝脏肿瘤发生没有潜在影响（Witaya et al., 1992）。现有国内外文献中均没有报道过吡喹酮有致癌等作用。
3 吡喹酮在草鱼体内的残留消除研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.1.1 药物和试剂
吡喹酮预混剂：2%，水产用，佛山市正典生物技术有限公司。 吡喹酮、反式-4-羟基吡喹酮、顺式-4-羟基吡喹酮和吡喹酮-D11等标准品和乙酸乙酯、乙腈等有机试剂同2.1.1.1。
3.1.1.2 仪器设备
三重串联四极杆质谱仪（型号API 5500）、高速离心机、超纯水制备系统、精密电子分析天平、旋涡混合器、多功能振荡器、氮气吹干仪等同2.1.1.2。
3.1.1.3 溶液配制
30%乙腈水溶液、吡喹酮、吡喹酮-D11、反式-4-羟基吡喹酮和顺式-4-羟基吡喹酮标准工作液等溶液均同2.1.1.3。
3.1.1.4 拌药饲料的制备
用广东海洋与水产高科技园常用的草鱼全价配合饲料，先检测饲料中不含吡喹酮，后按吡喹酮2%预混剂（水产用）说明书拌药：一次量，拌料投喂，每1 kg体重鱼（按5%投饵量计，每1 kg饲料用预混剂1.0~2.0 g），每3~4日一次，连续投喂3次。
3.2 结果
3.2.1 方法学验证
3.2.1.1 特异性
分析了20份不同来源的空白鱼肉样品基质，吡喹酮、反式-4-羟基吡喹酮和顺式-4-羟基吡喹酮在各自相对保留时间±2.5％范围内，未观察到基质干扰峰，典型MRM质量色谱图如图3.4所示。
4 吡喹酮在草鱼体内最大残留限量的制定
4.2 安全浓度（SC）
安全浓度（SC）采用标准成年人每天消耗的各种动物性食品的量（食耗值）进行估算：
SC=ADI×人体重÷食耗值 （4.2）
因为吡喹酮是已经确定ADI值的药物，在水产中已经得到批准使用，并且冷试验证明药物的代谢与已知在有关动物的代谢行为类似，按照WHO推荐的食物消费系数为300 g鱼肉，将ADI值100%分配进行推算得到MRL。
根据已有的毒理学资料吡喹酮ADI确定为0.17 mg/kg b.w.。因此，吡喹酮ADI分配到可食性组织（鱼肉）的安全浓度为：
SC鱼肉=0.17×60÷300=34 μg/g
5 全文总结
建立了灵敏、准确和可靠的LC-MS/MS同时测定草鱼血浆和肌肉中吡喹酮、反式-4-羟基吡喹酮及顺式-4-羟基吡喹酮的残留分析方法，并成功应用于草鱼体内的药动学和残留消除研究。
草鱼10 mg/kg b.w.吡喹酮单次灌胃给药，获得的吡喹酮在草鱼体内的主要药动学参数（Tmax、Cmax、AUC及t1/2β）表明，吡喹酮在草鱼体内吸收迅速，分布广泛、消除较快；而代谢物反式-4-羟基吡喹酮比顺式-4-羟基吡喹酮含量高、消除慢，残留时间长。
按吡喹酮预混剂（水产用）给药方式给药，残留消除实验结果表明，吡喹酮和4-羟基吡喹酮在草鱼体内含量较低，停药12 h后三种药物含量最高，其中，吡喹酮含量最高，为43.5 ng/g，反式-4-羟基吡喹酮和顺式-4-羟基吡喹酮含量分别为5.2 ng/g和4.7 ng/g。而且消除较快，96 h后顺式-4-吡喹酮就低于定量限，120 h后吡喹酮和反式-4-羟基吡喹酮含量都低于检测限。
根据上述研究结果，结合吡喹酮毒理学相关研究资料，建议吡喹酮在水产品中无需制定MRL，但推荐休药期为95度日。
参考文献（略）
